內(nèi)標(biāo)法是將一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物,加入到準(zhǔn)確稱(chēng)量的試樣中,根據(jù)被測(cè)試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比,來(lái)計(jì)算被測(cè)組分的含量。
細(xì)胞破碎是指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁,使細(xì)胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來(lái)的技術(shù),是分離純化細(xì)胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)(產(chǎn)品)的基礎(chǔ)。結(jié)合重組DNA技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)上的重大進(jìn)展,以前認(rèn)為很難獲得的蛋白質(zhì)現(xiàn)在可以大規(guī)模生產(chǎn)。
質(zhì)粒提取的得率和質(zhì)量與很多因素有關(guān),如宿主菌的種類(lèi)和培養(yǎng)條件、細(xì)菌細(xì)胞的裂解、質(zhì)??截悢?shù)、質(zhì)粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附膜的吸附能力、提取操作的熟練程度等等。
ICH指導(dǎo)原則分為四類(lèi),Q:質(zhì)量指導(dǎo)原則;S : 安全性指導(dǎo)原則;E : 有效性指導(dǎo)原則;M : 多學(xué)科指導(dǎo)原則
大腸桿菌培養(yǎng):將接種完成的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱或恒溫振蕩培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),即可得到所需的大腸桿菌菌落或種子液。
普通PCR所用的一對(duì)引物中有一個(gè)引物加多了,為正常的三倍只要引物特異性比較好,那么不會(huì)產(chǎn)生大的影響。如果恰巧是加多的這條引物不是很特異的話(huà),也許會(huì)擴(kuò)出來(lái)非特異帶。
蛋白質(zhì)的鹽析法:中性鹽對(duì)蛋白質(zhì)的溶解度有顯著影響,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,蛋白質(zhì)的溶解度增加,此稱(chēng)鹽溶;當(dāng)鹽濃度繼續(xù)升高時(shí),蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現(xiàn)象稱(chēng)鹽析。
用Trizol法沉淀RNA容易有一些雜質(zhì)的。部分色素是會(huì)和RNA一起沉下來(lái)。這種情況可以用75%冷的乙醇多洗幾遍。對(duì)后續(xù)qRT-PCR多數(shù)情況下沒(méi)什么影響。
發(fā)酵染菌:指在發(fā)酵過(guò)程中生產(chǎn)菌以外的其他微生物侵入了發(fā)酵系統(tǒng),從而使發(fā)酵過(guò)程失去真正意義上的純種培養(yǎng)。