酶與抗體交聯(lián)的方法有許多種,根據(jù)酶的結(jié)構(gòu)不同可采用不同的方法。對于制備HRP結(jié)合物,可用戊二醛二步法和過碘酸鈉法。尤以簡易過碘酸鈉法更為常用。
牛源血清又分為胎牛血清、新生牛血清和小牛血清,它們的區(qū)別方式主要由于牛齡和采血方式不同,其中胎牛血清因其抗體水平含量低對后續(xù)實驗結(jié)果影響小、生長因子含量水平高利于細胞增殖而應(yīng)用最廣。
大腸桿菌(E.coli)重組蛋白表達技術(shù)經(jīng)過多年的發(fā)展,相對于其他表達體系,算是非常成熟的一個體系。大腸桿菌蛋白表達系統(tǒng)主要有以下特點:遺傳背景清楚;易于培養(yǎng)和控制;轉(zhuǎn)化操作簡單;表達水平高;成本低;周期短。
乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)是單一多肽,分子量18848u。HBcAg在HBV感染中占有重要地位,他能反映血清中:Dane顆粒的存在及肝內(nèi)HBV的復(fù)制,并可與其他的HBV血清學(xué)標(biāo)志物起互相配合和互相補充的作用。只是由于其抗體具有很強的親和力,能迅速地與血清中的HBcAg結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,因而難以在血清中測得游離的HBcAg。常用ELISA和IRMA雙抗體夾心法檢測HBcAg。
抗凝是用物理或化學(xué)方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性,以阻止血液凝固。能夠阻止血液凝固的物質(zhì),稱為抗凝劑或抗凝物質(zhì)。檢查項目不同,所用的也不同。
當(dāng)往某些溶液中加入一定量的酸和堿時,有阻礙溶液pH變化的作用,稱為緩沖作用,這樣的溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽的混合溶液(如HOAc與NaOAc),弱堿及其鹽的混合溶液(如NH3·H2O與NH4Cl)等都是緩沖溶液。
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)已經(jīng)確定了具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料,作為分析測量行業(yè)中的“量具",在校準(zhǔn)測量儀器和裝置、評價測量分析方法、測量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平,以及在生產(chǎn)過程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著不可或缺的作用。
酸堿緩沖溶液由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液,能在一定程度上抵消、減輕外加強酸或強堿對溶液酸堿度的影響,從而保持溶液的pH值相對穩(wěn)定。這種溶液稱為酸堿緩沖溶液。
蛋白質(zhì)測定的Folin-酚比色法(即Lowry法)的定量范圍為5~100μg蛋白質(zhì),靈敏度高;但操作要費較長時間,且Folin試劑顯色反應(yīng)由酪氨酸、色氨酸和半胱氨氨酸引起,因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用;不同蛋白質(zhì)因酪氨酸、色氨酸含量不同而使顯色強度也稍有不同。 紫外吸收法測蛋白質(zhì)含量迅速、簡便、不消耗樣品,低濃度鹽類不干擾測定。因此,已在蛋白質(zhì)和酶的生化制備中廣泛采用,尤其在柱層析分離純化中,常用280nm進行紫外檢測,來判斷蛋白質(zhì)吸附或洗脫情況。