培養(yǎng)基的選擇應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料和檢驗(yàn)?zāi)康膩泶_定。目前國標(biāo)方法中使用的培養(yǎng)基有:馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)、孟加拉培養(yǎng)基(RBC)、高鹽察氏培養(yǎng)基(CAO),其中PDA和RBC適合于一般的霉菌和酵母菌生長,而CAO則適合于高滲性霉菌生長,酵母菌幾乎不長。
CFU的計(jì)量方式與直接計(jì)數(shù)菌體數(shù)量不同,它專門計(jì)算能夠在培養(yǎng)基上生長形成菌落的活細(xì)菌。理論上,一個(gè)活細(xì)菌在適宜條件下可以形成一個(gè)菌落,但實(shí)際上,由于細(xì)菌可能吸附在微小顆粒上或粘連在一起,多個(gè)細(xì)菌可能共同形成一個(gè)菌落。因此,CFU并不等同于細(xì)菌的實(shí)際數(shù)量,而是一種基于能夠形成可見菌落的活細(xì)菌的估算值。
甘油本身具有吸濕性,其大量羥基結(jié)合水分子,?降低了溶液中的“自由水”含量?,即降低了水活度。較低的水活度本身就不利于許多生化反應(yīng)和微生物活動(dòng)(即使在未凍結(jié)狀態(tài)下),這有助于在冷凍前和部分解凍狀態(tài)下保持菌種的穩(wěn)定性。
培養(yǎng)基在使用之前必須進(jìn)行滅菌處理,將其所含活菌全部殺死或全部除去。常用的滅菌方法有過濾除菌、干熱滅菌、濕熱滅菌及輻照滅菌等。其中,濕熱滅菌法又包括四種方式:煮沸法、流動(dòng)蒸汽滅菌法、間歇滅菌法和壓力蒸汽滅菌法。通常來說,使用比較多的是壓力蒸汽滅菌法。
在微生物限度檢測中遇到樣品不完全溶解的情況時(shí),應(yīng)通過樣品預(yù)處理、選擇合適的溶劑和過濾膜、優(yōu)化過濾過程以及其他措施來解決問題。同時(shí),需要不斷驗(yàn)證和調(diào)整方法,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
瓊脂糖凝膠濃度過低?:使用的瓊脂糖凝膠濃度過低也可能導(dǎo)致條帶波浪狀。通常使用1%濃度的膠進(jìn)行電泳較為合適,濃度過低會(huì)導(dǎo)致凝膠孔徑過大,DNA分子在電場中的遷移行為不穩(wěn)定?。