標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)定如無特殊規(guī)定,應(yīng)嚴(yán)格按照USP25或CP2000規(guī)定的方法操作。
常細(xì)胞生長得非??鞎r(shí),pH值通常下降得很快。此時(shí)可以及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外,培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊、NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細(xì)菌、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。
通常細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)需要加入血清,以維持細(xì)胞的生長和存活。而除了血清之外,部分細(xì)胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇等成分來維持細(xì)胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細(xì)胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細(xì)胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細(xì)胞加入量會(huì)有差異,需根據(jù)細(xì)胞類型判斷。
常規(guī)的PCR需要專門制備DNA模板,面菌落PCR可直接以單個(gè)菌落作為模板,用無菌牙挑取單個(gè)菌落到TE級沖液中,煮沸10mn,渦旋振蕩后短暫離心,用1-2pl裂解液作為DNA模板,省去抽提模板DNA這一步,通過特異性引物或通用引物對目的基因進(jìn)行快速擴(kuò)增大大節(jié)約了時(shí)間和成本
操作中必須有“無菌操作”的概念,所用玻璃器皿必須是完全滅菌的,不得殘留有細(xì)菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀、鑷子等器具也必須進(jìn)行消毒處理。樣品如果有包裝,應(yīng)用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。操作應(yīng)當(dāng)在超凈工作臺或經(jīng)過消毒處理的無菌室進(jìn)行。瓊脂平板在工作臺暴露15分鐘,每個(gè)平板不得超過15個(gè)菌落。
菌種在分離、保藏和生產(chǎn)過程中,極易遭致雜菌污染,因此必須對染有雜菌的菌種進(jìn)行提純,方能用于生產(chǎn)。根據(jù)污染的類型和程度,需采用不同的純化措施。
穩(wěn)定細(xì)胞系是指將外源基因整合到宿主細(xì)胞基因組中,使外源基因能夠在宿主細(xì)胞中長期穩(wěn)定表達(dá),這樣的細(xì)胞系稱為穩(wěn)定細(xì)胞系。其原理是將外源基因克隆到具有某種抗性的載體上,通過轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞,外源基因整合到宿主染色體上,用載體中所含抗性基因進(jìn)行篩選即可得到成功整合目的基因的細(xì)胞。
冷凍切片技術(shù),是一種在低溫條件下使組織快速冷凍到一定的硬度,然后進(jìn)行切片的一種方法。被稱為病理科的急診工作----在外科手術(shù)過程中,醫(yī)生切取部分腫瘤組織或其它病變標(biāo)本,送檢到病理科通過快速冷凍標(biāo)本制作切片,病理科診斷醫(yī)師對該切片進(jìn)行觀察快速做出判斷得出良、惡性結(jié)果或某種疾病的診斷。