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發(fā)布日期:2024/3/8 8:39:00

質粒提取常見問題分析

1、影響質粒提取的因素有哪些?

質粒提取的得率和質量與很多因素有關,如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細菌細胞的裂解、質粒拷貝數、質粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附膜的吸附能力、提取操作的熟練程度等等。

2、為什么從革蘭氏陽性菌中提取質粒要在懸浮液中加入溶菌酶?

革蘭氏陽性菌有一層細胞壁,必須加入溶菌酶才能使之溶解。

3、如何根據實驗需要選擇不同級別的產品?

從純度上:各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化,普通純度的質粒可以滿足要求;而對于轉染實驗,則要求使用高純度質粒提取試劑盒方能滿足要求。

從提取的量上:1-20μg,應選擇小量提取試劑盒;20-40μg,應選擇中量提取試劑盒;大于40μg,應選擇大量提取試劑盒。

從宿主菌上:分為普通細菌質粒提取試劑盒、G+菌質粒提取試劑盒和酵母菌質粒提取試劑盒,根據情況進行選擇。
 

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