RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正常或惡性增生的白細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。
懸浮培養(yǎng)指的是一種在受到不斷攪動(dòng)或搖動(dòng)的液體培養(yǎng)基里，培養(yǎng)單細(xì)胞及小細(xì)胞團(tuán)的組織培養(yǎng)系統(tǒng)
流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometry，F(xiàn)CM）是一種綜合應(yīng)用光學(xué)、機(jī)械學(xué)、流體力學(xué)、電子計(jì)算機(jī)、細(xì)胞生物學(xué)、分子免疫學(xué)等學(xué)科技術(shù)，使被測(cè)溶液流經(jīng)測(cè)量區(qū)域，并逐一檢測(cè)其中每一個(gè)細(xì)胞的物理和化學(xué)特性，從而對(duì)高速流動(dòng)的細(xì)胞或亞細(xì)胞進(jìn)行快速定量測(cè)定和分析的方法。
據(jù)研究表明，約98％的支原體存在于細(xì)胞表面和細(xì)胞間隙。支原體直徑約180~350nm，比細(xì)胞小很多，經(jīng)低速離心與細(xì)胞分離。通過(guò)反復(fù)懸浮沖洗、離心，加上使用我們的Zell Shield，即可在細(xì)胞培養(yǎng)四代以內(nèi)有效地祛除支原體。
醋酸鹽緩沖液（pH3.5）取醋酸銨25g，加水25ml溶解后，加7mol/L鹽酸溶液38ml，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)PH值至3.5（電位滴定法），用水稀釋至100ml，即得。
使用時(shí)應(yīng)注意：當(dāng)溶質(zhì)溶解或稀釋時(shí)出現(xiàn)吸熱放熱時(shí)，需先將溶質(zhì)在燒杯中溶解或稀釋?zhuān)⒗鋮s。
細(xì)胞凋亡通常稱(chēng)為細(xì)胞程序性死亡，是由基因控制的主動(dòng)性細(xì)胞死亡過(guò)程。越來(lái)越多數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡與多種疾病密切相關(guān)，如癌細(xì)胞具有連續(xù)增殖、抵抗細(xì)胞凋亡能力，利用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡可為腫瘤診斷，療效評(píng)價(jià)和預(yù)后預(yù)測(cè)提供了重要的參考指標(biāo)。
分離質(zhì)粒 DNA 與提取 RNA 或基因組 DNA 的提取方式是不相同的，因?yàn)楸仨氋|(zhì)粒與基因組 DNA 必須分離。如果此刻，您加入離液劑將立即釋放所有物質(zhì)，并且無(wú)法將小環(huán)狀 DNA 與高分子量染色體區(qū)別開(kāi)來(lái)。因此，在質(zhì)粒制備過(guò)程中中，直到裂解后才加入離液劑，鹽用于結(jié)合。
酶與抗體交聯(lián)的方法有許多種,根據(jù)酶的結(jié)構(gòu)不同可采用不同的方法。對(duì)于制備HRP結(jié)合物，可用戊二醛二步法和過(guò)碘酸鈉法。尤以簡(jiǎn)易過(guò)碘酸鈉法更為常用。
本實(shí)驗(yàn)用簡(jiǎn)易過(guò)碘酸鈉法進(jìn)行HRP標(biāo)記抗體。本法是以NaIO4先將HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再與Ig上的氨基相結(jié)合，所獲酶標(biāo)記抗體的產(chǎn)率高，將近70%的HRP和Ig結(jié)合，99%的Ig與酶結(jié)合，酶與Ig的活性無(wú)重大損失，是目前最常用的方法。
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