具備緩沖作用的緩沖溶液，通常針對(duì)溶液中放入一定量的酸和堿，能夠起到防止溶液PH值產(chǎn)生一定變化的良好作用。一般來說，弱酸以及其鹽溶液混合而成的溶液、弱堿與其鹽溶液進(jìn)行混合的溶液等，都可以被稱為緩沖溶液。能夠產(chǎn)生對(duì)酸的緩沖作用，是由于其中的弱酸根離子的原因。如果向該溶液里面滴加定量的強(qiáng)酸物質(zhì)，氫離子勢(shì)必要被弱酸根離子消耗完。這樣就能維持PH的固定值，使其不會(huì)變化。如果加入適量強(qiáng)堿，溶液里的弱酸會(huì)消耗氫氧根離子，從而阻礙PH發(fā)生改變。
普通PCR所用的一對(duì)引物中有一個(gè)引物加多了，為正常的三倍只要引物特異性比較好，那么不會(huì)產(chǎn)生大的影響。如果恰巧是加多的這條引物不是很特異的話，也許會(huì)擴(kuò)出來非特異帶。
培養(yǎng)細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞以胰酶消化計(jì)數(shù)后，用細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)出細(xì)胞密度，每孔接種 5×104 個(gè)細(xì)胞，添加細(xì)胞培養(yǎng)液至 500μL。通常情況下，該接種量的 H1299 或 293T 細(xì)胞在感染后第 3 天可生長(zhǎng)至 80%-90% 融合度。（接種目的細(xì)胞時(shí)，請(qǐng)根據(jù)細(xì)胞的實(shí)際生長(zhǎng)速度調(diào)整接種量，使目的細(xì)胞感染后第 3 天生長(zhǎng)至 80%-90% 融合度）
與Southern或Northern雜交方法類似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。既可以定性，又可以半定量的Western是初步鑒定蛋白質(zhì)最方便也是最通用的方法。
細(xì)菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易著色，若用一般染色法只能使菌體著色而芽胞不著色（芽孢呈無色透明狀）。芽孢染色法就是根據(jù)芽孢既難以染色而一旦染上色后又難以脫色這一特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。所有的芽孢染色法都基于同一個(gè)原則：除了用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加熱，以促進(jìn)芽孢著色。當(dāng)染芽孢時(shí)，菌體也會(huì)著色，然后水洗，芽孢染上的顏色難以滲出，而菌體會(huì)脫色。然后用對(duì)比度強(qiáng)的染料對(duì)菌體復(fù)染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，便于觀察。
牛血清白蛋白是血液中的主要成分（38g/100ml），分子量68kD，等電點(diǎn)4.8，含氮量16%，含糖量0.08%，僅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581個(gè)氨基酸殘基組成，其中35個(gè)半胱氨酸組成17個(gè)二硫鍵，在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。牛血清蛋白溶液可以作為測(cè)量蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線用。
注意觀察液滴落點(diǎn)周圍溶液顏色變化。開始時(shí)應(yīng)邊搖邊滴，滴定速度可稍快（每秒3~4滴為宜），但是不要形成水流。接近終點(diǎn)時(shí)應(yīng)改為加一滴，搖幾下，最后，毎加半滴，即搖動(dòng)錐形瓶，直至溶液出現(xiàn)明顯的顏色變化，準(zhǔn)確到達(dá)終點(diǎn)為止。
自然界中，質(zhì)粒是在營(yíng)養(yǎng)充足時(shí)出現(xiàn)的，它在結(jié)構(gòu)、大小、復(fù)制方式，每個(gè)細(xì)菌的拷貝數(shù)，在不同的細(xì)菌體內(nèi)的繁殖力不同，在菌種之間的轉(zhuǎn)移力等方面都會(huì)變化，可能最重要的是質(zhì)粒所攜帶的特征的改變。大多數(shù)原核生物的質(zhì)粒是雙鏈環(huán)狀的DNA分子；但是無論是在革蘭氏陽性還是陰性菌體內(nèi)都可以發(fā)現(xiàn)線狀質(zhì)粒。質(zhì)粒大小變化很大，可從幾個(gè)到數(shù)百個(gè)kb。
由于貼壁細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，接觸抑制，長(zhǎng)滿一瓶后貼壁較緊，不易取出。這時(shí)必須用胰蛋白酶或者膠原蛋白酶處理，使其分散開后取出，然后在放入新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
關(guān)注微信下單
